中文简体
Éppen most futtatott egy gradiens módszert, amely tökéletesen működött a múlt héten. A kalibrációs standardok tisztának tűnnek, de a minta kromatogramja 23,8 percnél extra csúcsot mutat. Cserélje ki az oszlopot, készítsen friss puffert, és ellenőrizze a detektort. A csúcs még mindig ott van. Ezután kicseréled a mozgófázisba kerülő vizet, és a műtárgy eltűnik. Ez a nagy teljesítményű folyadékkromatográfia valósága: a víz tisztasága minden elválasztás alatt ott van, és ha ez megváltozik, vele együtt változik a módszer is.
A víz tisztasága négy gyakorlati szempontból befolyásolja a HPLC adatok minőségét: az alapvonal stabilitása, a csúcs alakja, a visszatartás reprodukálhatósága és a műszer élettartama. Az érintett szennyeződések lehetnek szerves molekulák, oldott ionok, részecskék vagy mikrobák. Egyfajta szennyeződés kis mennyisége is a koncentrációjához képest aránytalan következményekkel járhat.
A víztisztaság főbb hatásai a HPLC-re
A HPLC rendszerben a víz reagens, nem passzív háttér. Ez hordozza a puffert, feloldja a mintát, és hozzájárul a detektor hátteréhez. A vízben lévő szennyeződések ezért közvetlenül az analitikai jelbe kerülnek. Az alábbi táblázat összefoglalja a leggyakoribb szennyeződéseket és azok hatásait.
| Szennyezőanyag | Példák vagy Forrás | Hatás HPLC-ben |
|---|---|---|
| Oldott szerves anyagok | Humin anyagok, lágyítók, tisztítómaradványok, oldószergőzök | UV-elnyelő szellemcsúcsok, alapvonal-sodródás, retenciós változások |
| Szervetlen ionok | Nátrium, klorid, szilikát, fémnyomok | Vezetőképesség-változások, interferencia az ionkromatográfiában és az LC-MS-ben, fémmel kapcsolatos csúcskiszélesedés |
| Részecskék | Finom gyanta, por, csapadék | Eltömődött frittek, növekvő ellennyomás, szivattyútömítés kopása, zajos alapvonal |
| Oldott gázok | Oxigén, szén-dioxid, nitrogén | Buborékok a detektorban, alapvonal tüskék, pH-eltérés |
| Mikroorganizmusok | Baktériumok és biofilmek tárolóedényekben | Oszlop szennyeződés, eltömődött frittek, hamis csúcsok, módszer instabilitása |
Ezek a hatások nem csak elméletiek. A víztartályban lévő mikrobiális biofilm UV-elnyelő metabolitokat szabadíthat fel, és ha ez a film kialakul, a víz egyszerű cseréje nem oldja meg a problémát, amíg a tartályt meg nem tisztítják és fertőtlenítik.
Mit jelent valójában a "HPLC-minőségű" és az 1-es típusú víz?
A legtöbb analitikai módszer olyan vizet igényel, amely megfelel az 1. típusú előírásoknak. Gyakorlatilag ez azt jelenti, hogy az ellenállás 25 Celsius-fokon körülbelül 18,2 megohm-centiméter, a vezetőképesség közel 0,055 mikrosiemen per centiméter, és az összes szerves szén elég alacsony ahhoz, hogy a víz ne hozzon létre látható UV vagy MS hátteret. Az ellenállás önmagában nem elég. Ismernie kell a TOC-szintet, a részecskeszámot és bizonyos alkalmazásoknál a szilikát- vagy nátriumértékeket is.
A tisztított víz pH-értéke nem hasznos specifikáció. Az ultratiszta víznek szinte nincs pufferkapacitása, és gyorsan felszívja a szén-dioxidot a levegőből, így az 5,6 körüli mért pH egyszerűen az oldott CO2-t tükrözi. A pH-érték az Ön által készített pufferolt mobil fázis pH-ja számít.
A vízminőségi követelmények a detektortól is függenek. A 210 nm-en végzett UV-detektálás különösen érzékeny a szerves szennyeződésekre, mivel ott sok szén-oxigén és szén-nitrogén kötés nyel el. Az LC-MS-nek nagyon alacsony nem illékony szennyeződésű vízre van szüksége az ionelnyomás és az addukt képződés elkerülése érdekében. A párolgásérzékelőket hasonlóan érinti a nem illékony szennyeződés, mert megemeli a háttérjelet. Az 1-es típusú víz ezért jó kiindulópont szinte minden HPLC alkalmazáshoz.
A palackozott HPLC minőségű víz működhet, de azt megfelelően kell tárolni és kezelni. Ellenőrizze az elemzési tanúsítványt, jegyezze fel a tételszámot, és soha ne feltételezze, hogy egy régi tartály mentes a biológiai növekedéstől.
A gradiens elúció láthatóvá teszi a vízszennyeződéseket
A vízszennyeződések leginkább a gradiens módszereknél láthatók. Izokratikus futásban egy UV-elnyelő szennyezőanyag egyszerűen megemelheti egy kicsit az alapvonalat. Gradiensben a vízfrakció magasra indul, és a szerves oldószeres frakció idővel emelkedik. A szennyeződések az oszlop tetején visszatarthatók, majd a szervesanyag-tartalom növekedésével eluálhatók. Ez szellemcsúcsokat és sodródó alapvonalat eredményez, amely megzavarhatja az integrációt és a mennyiségi meghatározást.
Éppen ezért az üres gradiens az egyik legegyszerűbb vízminőség-ellenőrzés. Futtassa le a pontos gradienst a minta befecskendezése nélkül. Ha csúcsok jelennek meg a vakpróbában, a mozgófázis gyanús.
Napi szokások, amelyek védik a víz tisztaságát
A tiszta víz nem véletlenül marad tiszta. A következő szokások megelőzik a HPLC gyakorlatban előforduló leggyakoribb problémákat.
- Használjon egy tisztítórendszerből származó vizet friss patronokkal, működő UV-lámpával és rendszeres fertőtlenítéssel.
- Gyűjtsük össze a vizet egy tiszta, kupakkal lezárt edénybe. Ne hagyja nyitva a tartályt a rendszer működése közben.
- Ne tároljon vizet napokig. A mozgó fázist lehetőség szerint még ugyanazon a napon készítse elő friss vízzel.
- Kerülje a friss víz hozzáadását a részben feltöltött tartályhoz. Feltöltés helyett cserélje ki a tartály tartalmát.
- Futtasson le egy üres gradienst az elemzéshez használt hullámhosszon, és rögzítse az eredményt.
- Dokumentálja a fajlagos ellenállást, a TOC-t és a vízgyűjtés dátumát az analitikai rekordokban.
A palackozott vizet használó laborokra ugyanazok a szabályok vonatkoznak. Ellenőrizze a lejárati időt, használat után azonnal zárja le a tartályt, és ne tegye vissza a főzőpohárból a fel nem használt vizet az üvegbe.
Az adalékok a vízproblémát módszerproblémává változtatják
A mozgófázisok ritkán tartalmaznak egyedül vizet. Puffersókat, savakat, ionpáros reagenseket és néhány speciális módosítót viszonylag alacsony koncentrációban adnak hozzá. Ha a víz nyomokban UV-elnyelő szennyeződéseket tartalmaz, ezek a szennyeződések nem változtatják meg a pufferkapacitást, de megjelenhetnek a detektor jelében.
Az ionos folyadékokat néha mozgófázis-módosítóként használják a csúcsok alakjának vagy szelektivitásának javítására. Amikor kiválaszt egyet, ugyanazt a tisztasági szabványt kell alkalmazni. Például 1-etil-3-metil-imidazolium-tetrafluor-borát gyakori ionos folyadék a kromatográfiás vizsgálatokhoz. Olyan vízben kell feloldani, amely már megfelel az 1. típusú előírásoknak; ellenkező esetben az adalékanyag újabb szennyeződési forrássá válik. Ha meg akarja érteni e vegyületek elválasztással kapcsolatos tulajdonságait, a mi áttekintést arról, hogyan teljesítenek az ionos folyadékok az elválasztási folyamatokban gyakorlati változókat takar.
CAS:143314-16-3 -1 -Etil-3-metil-imidazolium-tetrafluor-borát folyadékszállító Az Ldet technológia Kína egyedi CAS:143314-16-3 -1 -Etil-3-metilimidazolium-tetrafluoroborát folyadékszállítója és az 1-etil-3-metilim... Termék megtekintése → A tisztaság a szállítónál kezdődik
A Zhejiang Ldetnél ionos folyadékokat és speciális vegyi anyagokat gyártunk. A gyártásból tudjuk, hogy a kiindulási anyagban lévő nyomokban lévő szennyeződés megváltoztathatja a teljesítményt. Ezért a kibocsátás előtt ellenőrizzük a víztartalmat, a maradék halogenideket és az UV viselkedést. Ugyanez a tudományág a HPLC-laborhoz tartozik: olyan anyagokat válasszon, amelyekhez dokumentált specifikációk tartoznak. Például 1-butil-3-metil-imidazolium-tetrafluor-borát elérhető tisztasági adatokkal, amelyek lehetővé teszik annak felmérését, hogy kompatibilis-e az észlelési módszerrel.
CAS: 174501-65-6-1-butil-3-metil-imidazolium-tetrafluor-borát folyadékszállítók Az Ldet technológia kínai egyedi CAS: 174501-65-6-1-Butil-3-metilimidazolium-tetrafluoroborát folyadékszállítók és 1-butil-3-metil-imid... Termék megtekintése → Mit kell ellenőrizni az elemzési bizonyítványon
- Maradék halogenid tartalom, mert a halogenidek befolyásolhatják az ioncserés elválasztást és a korróziót.
- Víztartalom, mivel a víz megváltoztatja az adalékanyag effektív koncentrációját.
- UV-spektrum vagy UV-határérték, így megjósolhatja a háttérelnyelést.
- Tételenkénti következetesség, mert egy új tétel nem változtathatja meg csendben a módszert.
Ha segítségre van szüksége egy anyag és a módszer összehangolásához, megteheti beszélje meg műszaki csapatunkkal a tisztasági adatokat és az egyéni követelményeket .
Kezelje a vizet a módszer részeként
A víztisztaság a HPLC-ben nem egyszeri beállítás. Ez egy napi változó, amely az évszaktól, a tároló palacktól és a tisztítórendszer állapotától függően változhat. Használjon 1-es típusú vizet, ellenőrizze a TOC-t és az ellenállást, kezelje megfelelően, és válassza ki a nyomon követhető adalékanyagokat. Egy nanogramm analitra épülő módszerben a víz soha nem „csak víz”.
